تعیین نقش پروتئین عمده غشایی فیتوپلاسمای جاروک لیموترش در برهمکنش با حشرات ناقل

مطالعات مشخص کرده که چند فیتوپلاسما از گروههای فیلوژنی مختلف پروتئین نوع imp (immunodominant membrane protein) را در مقادیر مختلف بیان می کنند. در این تحقیق ژن کد کننده پروتئین اصلی غشاء چند فیتوپلاسما از گروه فیلوژنتیکی 16srii بررسی شد نتایج بررسی نشان داد که ژن مزبور دارای تنوع ژنتیکی قابل توجهی و تحت فشار انتخاب مثبت است. آمینواسیدهای تحت تاثیر این فشار همگی در قسمت انتهای c (c-terminal) قرار داشتند. بررسیها نشان دادند که قسمت c این پروتئین در خارج از سیتوپلاسم و قسمت n آن داخل سیتوپلاسم سلول فیتوپلاسما قرار می گیرد. بیان imp در گیاهان میزبان با آنتی سرمهای تهیه شده بر علیه پروتئین نوترکیب imp از فیتوپلاسمای جاروک لیموترش و همچنین با آنتی سرم تهیه شده بر علیه فیتوپلاسمای جاروک یونجه تائید شد. این بررسی نشان داد که پروتئین 19 کیلودالتون مربوط به imp در گیاهان آلوده به چند فیتوپلاسما از گروه 16srii (و نه همه فیتوپلاسماها) قابل ردیابی است. نقش پروتئین imp فیتوپلاسمای جاروک لیموترش در برهمکنش با زنجرکهای ناقل (شاملmacrosteles quadrpunctulatus، euscelidius variegates، empoasca decipiens، scaphoideus titanus و hishimonus phycitis) مطالعه شد. نتایج آزمونهای dot far western و far western نشان داد که imp با پروتئینهایی از این زنجرکهای ناقل برهمکنش دارد. با استفاده از روش affinity chromatography پروتئینهای مزبور از زنجرکها جدا سازی شدند. در مجموع 20 پروتئین با وزنی بین 30 تا 200 کیلو دالتون از زنجرکهای مذکور در ژل sds ردیابی شد. نتایج ms/ms منجر به شناسایی این پروتئینها به عنوان پروتئینهای atp synthase زیرواحدهای آلفا و بتا، اکتین، زنجیره سنگین میوزین، آلفا توبولین و آرژنین کیتناز شد. بررسی با روش وسترن بلات نتایج شناسایی این پروتئینها به عنوان atp synthase آلفا و بتا و اکتین را تائید کرد ولی نتیجه شناسایی پروتئین آلفا توبولین را تائید نکرد. مشاهدات با میکروسکوپ کونفوکال نشان داد که پروتئین imp فیتوپلاسمای جاروک لیموترش در غشاء سلول و نیز در سیتوپلاسم سلولهای زنجرک m. quadripuctulatus تجمع می یابد. همچنین سیگنالهای مربوط به پروتئین imp در محل سیگنالهای مربوط به پروتئین atp synthase زیرواحد آلفا و مخصوصا زیرواحد بتا قرار می گیرند. نقش احتمالی این پروتئینها در انتقال با ناقل فیتوپلاسمای جاروک لیموترش مورد بحث قرار می گیرد.